Milieu chromogène

Le premier chromogène rencontré est l'ONPG (orthonitrophénylgalactoside) dont l'hydrolyse, par la β-galactosidase (ou ONPG-hydrolase) libère l'ONP (orthonitrophénol ou 2-nitrophénol) de coloration jaune. De très nombreuses enzymes sont mises en évidence par ce type de technique.

La diffusion de l'utilisation de chromogènes est devenue très importante par leur incorporation dans les milieux de culture : les colonies sont ainsi colorées par le ou les chromophore(s). Attention : des colonies sont naturellement colorées ; la lecture est alors complexe car les couleurs peuvent s'additionner…

L'association de plusieurs chromogènes est souvent réalisée, par exemple la recherche de la β-glucuronidase et de la β-glucosidase dans les milieux destinées à l'analyse des urines en biologie médicale. D'autres enzymes sont recherchées pour les urines comme dans le milieu UTI (voir image ci-dessous)

Milieu URI Deux types de colonies sur URI. Les colonies rouges sont β-galactosidase +, coliformes probables. Les petites colonies bleues sont β-glucosidase + et sont des Enterococcus Les grosses colonies bleues peuvent être des Klebsiella-Enterobacter-Serratia… Deux types de colonies sur URI. Les colonies rouges sont β-galactosidase +, coliformes probables. Les petites colonies bleues sont β-glucosidase + et sont des Enterococcus Les grosses colonies bleues peuvent être des Klebsiella-Enterobacter-Serratia…	Milieu CPS Milieu adapté au diagnostic des infections urinaires, par la mise en évidence d'une activité β-glucuronidase, il permet une identification directe d'Escherichia coli responsable de 80 % des cystites en France (40 % à l’hôpital), il permet aussi la mise en évidence de l'activité β-glucosidase chez les entérocoques et certaines entérobactéries (Klebsiella, Enterobacter, Serratia et Citrobacter). Orientation possible vers Proteus grâce à la mise en évidence de l'activité TDA par addition d'une goutte de chlorure de fer III. La production d'indole est milse en évidence éventuellement par une goutte de réactif (Kovacs par exemple). Das certaines compositions, du fer III dans le milieu visualise directement la TDA par une couleur brune autour des colonies TDA +. Proteus (TDA+) sur CPSE
Milieu Chromagar pour les levures Autre exemple avec le milieu Chromagar pour les levures. Isolement de levures sur Chromagar (à compléter de la nature des enzymes et l'identification correspondante)	Milieu SM2  Milieu sélectif des bactéries à Gram négatif qui permet la mise en évidence de Salmonella dans les selles grâce à la révélation d'une activité estérase que spécifique des salmonelles. Salmonella enterica enterica sérotype Enteritidis isolé sur SM2 à partir d'une coproculture.
CAN2  milieu sélectif des levures qui permet la mise en évidence de Candida albicans par la mise en évidence de l'activité hexosaminidase. Culture de Candida albicans sur CAN2

De nombreux milieux chromogènes existent. Malheureusement, les fabricants ne donnent pas toujours le nom des activités enzymatiques recherchées mais seulement les couleurs obtenues. Les tableaux ci-dessous (en préparation) tente une approche exhaustive qui devra être complétée…

Les milieux chromogéniques sont composés pour assurer la culture et une sélection, aussi importante que possible, des microorganismes cibles.

Les chromogènes et les chromophores ne doivent évidemment pas être toxique pour les bactéries recherchées, à la concentration utilisée.

4-méthyl-umbelliférone ex. : 4-Méthylumbelliféryl-β-glucuronide	Alizarine(elle peut être substituée)ex. : l'Alizarine-β-glucuronide	Radical Indoxyl Ex avec Substitutions possibles : *le 5-Bromo-4-chloro- 3-indolyl-β-glucuronide, * le 5-Bromo-6-chloro-3-indolyl-β-glucuronide, * le 6-Chloro- 3-indolyl-β-glucuronide,
Formule à déterminer probablement protégée par secret industriel ex. : Aldol-β-glucuronide	Formule à détermienr Cyclohexenoesculetine-β-glucuronide

• Intérêt des milieux chromogènes en microbiologie, Catherine de Beaumont, 2006
• Dictionnaire des techniques - Microbiologie technique - CRDP d'Aquitaine (voir www.reseau-canope.fr/) - Jean-Noël JOFFIN - Guy LEYRAL†

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