Chromatographie

• chromatographie sur couche mince (CCM ou TLC en anglais) ;
• chromatographie en phase gazeuse (CPG ou GC en anglais) également appelée CPV (chromatographie en phase vapeur) ;
• chromatographie en phase liquide (CPL ou LC en anglais) ;
• chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP ou HPLC en anglais) ;
• chromatographie en phase supercritique (CPS ou SFC en anglais).

• chromatographie d'adsorption/d'affinité ;
• chromatographie de partage ;
• chromatographie à échange d'ions ;
• chromatographie chirale (qui est, soit de la CPG, soit de la CPL) ;
• chromatographie d'exclusion stérique (CES ou SEC en anglais) ;

• chromatographie sur colonne, regroupant notamment chromatographie en phase liquide à haute pression (HPLC) et chromatographie en phase gazeuse (CPG) : la phase stationnaire est dans un tube étroit et la phase mobile progresse par gravité ou différence de pression ;
• chromatographie planaire[3] (qui recouvre CCM et chromatographie sur papier) : la phase stationnaire est sur la surface d'un support plat (CCM) ou dans une feuille de cellulose poreuse (chromatographie sur papier) ; la phase mobile se déplace par capillarité ou par gravité.

Pour améliorer la qualité de la séparation et de l'identification, de nouveaux appareils permettent :

• de coupler deux types de chromatographies (chromatographie bi-dimensionnelle) ;

• d'associer la séparation chromatographique à une autre technique d'analyse telle que la spectrométrie de masse (méthodes GC-MS et LC-MS).

Le pouvoir séparateur d’une colonne est fonction des vitesses relatives d’élution. Ces vitesses sont donc fonction du coefficient de distribution des solutés entre les 2 phases :

${\displaystyle A_{stationnaire}\Longleftrightarrow A_{mobile}}$

Coefficient de distribution :

${\displaystyle K={\frac {C_{S}}{C_{M}}}}$

où C_S est la concentration du soluté en phase stationnaire et C_M la concentration du soluté en phase mobile.

Temps de rétention t_R : temps qui s’écoule entre l’injection de l’échantillon et l’apparition d’un pic de soluté sur le détecteur d’une colonne chromatographique.

Temps mort t_M : temps nécessaire pour qu’une espèce non retenue par la phase stationnaire traverse la colonne.

Vitesse linéaire moyenne de déplacement du soluté :

${\displaystyle {\overline {\nu }}={\frac {L}{t_{R}}}}$

où L est la longueur de la colonne.

Vitesse linéaire moyenne de la phase mobile :

${\displaystyle {\overline {u}}={\frac {L}{t_{M}}}}$

Relation entre vitesse de déplacement et coefficient de distribution :

${\displaystyle {\overline {\nu }}={\frac {\overline {u}}{1+K{\frac {V_{S}}{V_{M}}}}}}$

où V_S et V_M sont les volumes de solutés respectivement dans la phase stationnaire et mobile (aussi appelé volume mort), or ces volumes sont proportionnels aux volumes des 2 phases respectivement, ils peuvent donc être estimés si on connaît la structure géométrique de la colonne.

Temps réduit t'_R :

${\displaystyle t'_{R}=t_{R}-t_{M}}$

Volume réduit V'_R :

${\displaystyle V'_{R}=V_{R}-V_{M}}$

Débit D :

${\displaystyle D={\frac {V_{M}}{t_{M}}}={\frac {V_{R}}{t_{R}}}}$

Certains paramètres qui affectent les vitesses relatives des analytes peuvent être modifiés :

• Vitesse linéaire de la phase mobile ${\displaystyle {\overline {u}}}$
• Coefficient de diffusion dans la phase mobile
• Coefficient de diffusion dans la phase stationnaire
• Facteur de capacité k’
• Diamètre des particules support
• Épaisseur de la couche liquide sur la phase stationnaire

Facteur de capacité k' : paramètre expérimental important permettant de décrire la vitesse de progression des solutés dans les colonnes. C’est le rapport des quantités d’un analyte présentes à l’équilibre dans les 2 volumes de phase stationnaire et mobile adjacentes. Le facteur de capacité dépend de la température (CPG), du remplissage de la colonne (CPG), de la composition de la phase mobile et stationnaire (HPLC)...

${\textstyle K'=(tR-tM)/tM}$

• k'<1 : élution trop rapide
• 1<k'<5 : élution optimale
• 5<k' : élution trop lente

Facteur de sélectivité α : rapport du coefficient de distribution du soluté qui est retenu le plus sur le coefficient de distribution du soluté qui est retenu le moins. Le facteur de sélectivité de deux analytes permet d’estimer à quel point la colonne peut les séparer. Il est donc utilisé pour calculer le pouvoir séparateur d’une colonne. α>1 toujours.

${\displaystyle \alpha ={\frac {K_{B}}{K_{A}}}={\frac {k'_{B}}{k'_{A}}}={\frac {t'_{R}(B)}{t'_{R}(A)}}={\frac {V'_{B}}{V'_{A}}}}$

L’efficacité d’une colonne dépend du degré d’élargissement du pic qui se produit à mesure que l’analyte parcourt la colonne. Cet élargissement dépend du temps de séjour de l’analyte dans les 2 phases :

• ${\displaystyle t_{R}}$ grand : pics larges ;
• ${\displaystyle t_{R}}$ petit : pics fins.

L’efficacité d’une colonne s’évalue à partir de l’un ou l’autre de ces deux termes :

• H = hauteur équivalente à un plateau théorique
• N = nombre de plateaux théoriques

L’efficacité augmente quand N augmente ou quand H diminue à L constante. En notant ${\displaystyle \sigma ^{2}}$ la variance, ${\displaystyle \delta \approx 2.355\sigma }$ la largeur du pic à mi-hauteur et ${\displaystyle \omega \approx 4\sigma }$ la largeur à la base du pic,

${\displaystyle N=\left({\frac {t_{R}}{\sigma }}\right)^{2}\approx 5,54{\left({\frac {t_{R}}{\delta }}\right)}^{2}\approx 16{\left({\frac {t_{R}}{\omega }}\right)}^{2}}$

${\displaystyle H={\frac {L}{N}}={\frac {L\sigma ^{2}}{t_{R}^{2}}}}$

L’importance des effets cinétiques sur l’efficacité de la colonne dépend essentiellement de la durée de contact entre la phase mobile et la phase stationnaire, dépendant elle-même de la vitesse d’écoulement de la phase mobile. L’élargissement des pics est minimisé en réduisant la granulométrie du matériau de remplissage et le diamètre de la colonne. En effet la phase stationnaire est granulée et le solvant occupe le volume des interstices, ce volume est appelé volume mort de solvant. H augmente avec ce volume et diminue avec le diamètre de la colonne.

La résolution R_S d'une colonne est la mesure quantitative de son aptitude à séparer deux analytes A et B :

${\displaystyle R_{S}=2{\frac {t_{R}(B)-t_{R}(A)}{\omega _{B}+\omega _{A}}}}$

• Si ${\displaystyle R_{S}>1,5}$ : séparation complète de A et B
• Si ${\displaystyle R_{S}\approx 1,0}$ : séparation incomplète de A et B
• Si ${\displaystyle R_{S}<0,75}$ : analytes A et B mal séparés

Remarque : une résolution de 1,5 correspond à un recouvrement des pics de 1 %.

Lien entre résolution et nombre de plateaux théoriques :

${\displaystyle R_{S}={\frac {1}{4}}{\sqrt[{2}]{N}}\left(1-\alpha \right){\frac {k'}{1-k'}}}$

Cette relation permet de remarquer que la résolution R_S d'une colonne est proportionnelle à la racine carrée de sa longueur car le nombre de plateaux théoriques N est proportionnel à la longueur L de la colonne. Avec une phase stationnaire donnée on peut améliorer la résolution de la colonne en augmentant le nombre de plateaux théoriques donc en augmentant la longueur de la colonne. Mais ceci augmente la durée de l’analyse, un compromis est donc nécessaire.

• Modification de la hauteur équivalent à un plateau théorique (diamètre colonne, granulométrie…)
• Modification du facteur de capacité (composition phase mobile, température, solvant…)
• Modification du facteur de sélectivité (composition phase mobile, température colonne, composition phase stationnaire, effets chimiques (complexes…)